引物,是一小段单链DNA或RNA,作为DNA复制的起始点,在核酸合成反应时,作为每个多核苷酸链进行延伸的出发点而起作用的多核苷酸链,在引物的3′-OH上,核苷酸以二酯链形式进行合成,因此引物的3′-OH,必须是游离的.
在PCR(聚合酶链式反应)技术中,已知一段目的基因的核苷酸序列,根据这一序列合成引物,利用PCR扩增技术,目的基因DNA受热变性后解链为单链,引物与单链相应互补序列结合,然后在DNA聚合酶作用下进行延伸,如此重复循环,延伸后得到的产物同样可以和引物结合.
PCR又称聚合酶链式反应,PCR的过程可看作是生物体外的特殊DNA复制,PCR的最大特点,是能将微量的DNA大幅增加引物的作用。PCR的三个步骤分别是1.高温变性:利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链,;2.低温退火:低温(经常是60°C左右)时引物与单链按碱基互补配对的原则结合;3.中温延伸:当调温度至DNA聚合酶最适反应温度(72°C左右),DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5′-3′)的方向合成互补链。基于聚合酶制造的PCR仪实际就是一个温控设备,能在变性温度,复性温度,延伸温度之间很好地进行控制。它需要DNA模板,上下游引物,taqDNA聚合酶,dNTP以及缓冲液(镁离子很重要),当然还有超纯水。当然现在实验室做PCR,买的缓冲液里面是直接加好聚合酶和dNTP的,可以直接用。一般的25微升体系里DNA模板和上下游引物各1微升,PCR MIX12.5微升,ddH2O9.5微升。
分子标记的概念有广义和狭义之分。广义的分子标记是指可遗传的并可检测的DNA序列或蛋白质。狭义分子标记是指能反映生物个体或种群间基因组中某种差异的特异性DNA片段。
引物定义1:在聚合作用的起始时,可以刺激合成另一种大分子,并与反应物以共价键形式连接的序列。在核酸化学中,引物是一段短的单链RNA或DNA片段,可结合在核酸链上与之互补的区域,其功能是作为核苷酸聚合作用的起始点,核酸聚合酶可由其3′端开始合成新的核酸链。体外人工设计的引物被广泛用于聚合酶链反应、测序和探针合成等。
定义2:在多聚酶链式反应中,用于引导脱氧核糖核酸合成的一段核苷酸序列。
定义3:(1)DNA复制时,由引物酶催化合成的DNA复制的RNA引导序列。(2)体外人工合成DNA中,可与模板结合的单链核苷酸片段。
定义4:含游离3′-羟基并引发聚合反应的寡核苷酸序列